-
A في عملية تكوين النظام ، تكون مكونات مثل الاشعال والإنزيمات مفرطة ، لكن القوالب ليست مفرطة. قالب جزيئات الحمض النووي بشكل عشوائي أدخل كل نظام تفاعل صغير. بعد تضخيم PCR ، يكمل النظام الذي يحتوي على القالب التضخيم ، ولا يحتوي النظام على القالب دون تضخيم.
-
A السبب: يتم تحور السلالة ، والتحقيق الحالي غير مناسب للكشف ؛ لا يمكن اكتشاف الحمض النووي الناجم عن طريقة الاستخراج (الفشل في استخراج البكتيريا والفطريات ، وما إلى ذلك في العينة) تمامًا ؛
التحقق من الاستبعاد: يمكن التحقق من استخراج الحمض النووي من الثقافة ، تليها التضخيم مع تحقيقاتنا ؛ يوصى بأن تكون ثقافة الدم واختبار الحمض النووي نفس عينة الدم.
-
A قياسي الحكم ≥ 3 قطرات إيجابية ، ولكن بالنسبة للقطرات الإيجابية في النقطة الحرجة ، من الضروري إجراء تحليل دائم مع مواد مراقبة الجودة السلبية/ الإيجابية. عندما يكون هناك خط عمودي للإشارات ، يتم الحكم عليه كإشارة غير إيجابية.
عينات منخفضة التركيز ، يمكن تحديد عازلة متعددة أعلى لتعديل تحميل العينة.
-
A البلازما: ينصح 2 2 مل ، المكونات بسيطة نسبيًا ، ويتم إزالة تلوث الحمض النووي البشري. تركيبة الحمض النووي أبسط ، وتركيز الحمض النووي البكتيري أعلى ، وهو مريح للكشف.
ملاحظة: يجب ألا تكون سرعة الدوران مرتفعة للغاية أثناء الطرد المركزي ، وإلا فإنها ستؤدي بسهولة إلى فقدان البكتيريا داخل الخلايا وتؤثر على نتيجة الاختبار النهائية ؛
الدم الكامل: ينصح ≥4ml ، والمكونات كاملة نسبيا ، والاتساق مع عينات ثقافة الدم جيدة ، ولكن هناك تلوث الحمض النووي البشري.
-
A البكتيريا (البكتيريا إيجابية الجرام ، البكتيريا سالبة الجرام) ، الفطريات الغازية ، الفيروسات. في الوقت نفسه ، يمكن أيضًا إجراء اكتشاف جين مقاومة الأدوية.
-
A يوصى بإعداد تجربة تحكم للتقسيم. عند عدم تعيينه ، استخدم عمومًا كثافة مضان 3000 كنقطة العتبة ، أو استخدم المجموعة السلبية كمرجع للحكم على الإيجابية. يمكنك الرجوع إلى تجربة التدفق الخلوي لتقسيم.
-
A يعتمد القياس الكمي للفلور على منحنى التضخيم. سيتم حساب إشارة الكشف عن كل دورة بواسطة اللوغاريتم من 2 إلى N Power ، والتي لا يمكن استخدامها إلا لتمييز اختلاف أكثر من مرتين. يمكن لنظام PCR الرقمي اكتشاف اختلافات التعبير الجيني تصل إلى 0.1 أضعاف بواسطة صيغة حساب توزيع Poisson.
-
A لتردد الطفرة ، يمكن أن تصل PCR الرقمية إلى 0.01 ٪ أو أقل ، ويمكن تحقيق نسخة واحدة للكائنات الحية الدقيقة ؛ يمكن أن يحقق RT-PCR فقط 1 ٪.
