زيت توليد القطرات

في PCR الرقمية Droplet ، يلعب زيت توليد القطرات دورًا مهمًا في عملية تقسيم خليط تفاعل PCR إلى آلاف أو ملايين القطرات الفردية. هذه القطرات بمثابة أوعية تفاعل منفصلة ، كل منها يحتوي على جزء من جزيئات الحمض النووي المستهدف أو الحمض النووي الريبي.

زيت توليد القطرات هو سائل متخصص يعتمد على الزيت ويستخدم لإنشاء وتثبيت القطرات في DPCR. الزيت غير قابل للامتنان مع خليط تفاعل PCR ، ويشكل مرحلة مميزة تحيط وتغلف قطرات خليط التفاعل. يساعد حاجز الزيت هذا على عزل كل تفاعل PCR وتقسيمه ، ومنع التلوث المتبادل وضمان تقدير دقيق للأحماض النووية المستهدفة.

تشمل الخصائص الرئيسية لزيت توليد قطرات الخراب:

1. عدم قابلية: زيت توليد القطرات غير قابل للامتنان مع خليط تفاعل PCR. هذا يضمن أن الزيت يشكل قطرات مميزة ، وفصلها عن قطرات خليط التفاعل.

2. الاستقرار: الزيت مستقر ويحافظ على خصائصه الفيزيائية أثناء عملية ركوب الدراجات PCR. لا يتبخر أو يتحلل أو يسبب تداخلًا مع تفاعل PCR.

3. الشفافية البصرية: لدى الزيت شفافية بصرية عالية لتمكين الكشف الفعال وتحليل إشارات الفلورسنت التي تم إنشاؤها خلال DPCR.

4. الخمول: الزيت خامل كيميائيًا لتجنب التدخل في تفاعل PCR وتضخيم الحمض النووي.

خلال عملية DPCR ، يتم استحلاب زيت توليد القطرات ومزيج التفاعل. تنشئ عملية الاستحلاب هذه تعليقًا مستقرًا للقطرات ، حيث تحتوي كل قطرة على جزيء مستهدف واحد أو لا شيء على الإطلاق. تتعرض القطرات المتولدة بمساعدة زيت توليد القطرات في وقت لاحق لركوب الدراجات الحرارية ، حيث يحدث تضخيم PCR. بعد التضخيم ، يتم تحليل القطرات بشكل فردي لتحديد وجود أو عدم وجود جزيء المستهدف على أساس إشارات التألق.

باختصار ، يعتبر زيت توليد القطرات مكونًا حاسمًا في PCR الرقمي القطرات لأنه يتيح تكوين وتثبيت القطرات الفردية التي تحتوي على خليط تفاعل PCR. يسمح بالتقسيم الدقيق وعزل الأحماض النووية المستهدفة ، مما يسهل القياس الكمي الدقيق والتحليل في فحوصات DPCR.